En condiciones normales, moléculas mayores de 100kDa, como las inmunoglobulinas, son retenidas en la sangre y las moléculas más pequeñas <10kDa pasan libremente a la orina. Otras moléculas de un tamaño intermedio, como las cadenas livianas libres (~ 25 kDa), atraviesan la membrana glomerular y son luego reabsorbidas por el sistema tubular de nefronas.

 

¿Qué es la proteinuria?

La proteinuria (exceso de proteína en la orina) está asociado a enfermedades glomerulares y tubulares de la nefrona y a trastornos de las células plasmáticas que causan concentraciones elevadas de proteínas en la sangre (proteinuria por sobrecarga).

Ciertas enfermedades incluyendo al mieloma múltiple (MM), amiloidosis (AL), macroglobulinemia de Waldenström y enfermedad por depósito de cadenas ligeras, son diagnosticadas por la presencia de cadenas livianas libres monoclonales en orina, también conocida como proteína de Bence Jones (PBJ). Estas proteínas se han descrito en pacientes con linfomas, leucemia linfocítica crónica y gammapatía monoclonal de significado incierto.

Las PBJ tienen un significado clínico importante, a nivel diagnóstico y de seguimiento, en la mayoría de las gammapatías monoclonales. Ante la sospecha de una gammapatía monoclonal, el estudio en orina puede ser eliminado inicialmente, ya que la realización en suero de la electroforesis de proteínas séricas, junto a la inmunofijación (IF) y la medida de las cadenas ligeras libres, provee suficiente sensibilidad para su diagnóstico. Sin embargo, una vez establecido este, es necesario realizar el estudio en orina. En el caso de la amiloidosis AL, el estudio en orina incrementa la sensibilidad de detección y debe realizarse junto a los estudios en suero. Asimismo, el estudio de la PBJ está indicado en el seguimiento y evaluación del grado de respuesta tras el tratamiento en el MM.

El estudio de la PBJ requiere métodos con buena resolución y elevada sensibilidad, capaces de detectar concentraciones superiores a 10 mg/L. Si bien la IF es el método más sensible y de referencia para su detección e identificación, es la electroforesis en gel de agarosa (AG) el más empleado para su medida. La AG permite además el estudio del tipo de proteinuria.

La electroforesis capilar es un método de separación de proteínas basada en el desequilibrio neto entre el flujo electroendosmótico y la movilidad electroforética de las proteínas, cuando se aplica un voltaje elevado a lo largo de un capilar. Las proteínas se detectan por medición de la absorbancia del enlace peptídico en la región ultravioleta (214 nm). El empleo de la EC en suero ha revelado tener mayor sensibilidad en la detección de componentes monoclonales que la AG, siendo el principal inconveniente de su aplicación en orina la presencia en esta de numerosas sustancias de bajo peso molecular y sales, que absorben en la región ultravioleta. Esto obliga a un pretratamiento de la muestra para eliminar los interferentes antes de su procesamiento.

Si bien el tiempo necesario para realizar la preparación de la muestra es largo, el requerido en el análisis por cada EC es reducido, por lo que el tiempo total invertido es similar al empleado para realizar la AG.

Los valores de sensibilidad obtenidos en el estudio de la detección de la PBJ por EC fueron muy elevados (96-100%), tanto en las muestras con alta concentración de proteínas totales en orina (PTO) (superior a 150 mg/L) como en las que tienen baja concentración (inferior a 150 mg/L).

la evaluación de la EC como método de detección y medida de la PBJ ha mostrado que la reproducibilidad del método es alta, los valores de sensibilidad y especificidad obtenidos son elevados y el límite de detección es muy bajo, lo que permite detectar la PBJ en concentraciones muy pequeñas. ˜ Además, la identificación del componente monoclonal mediante inmunotipado es buena, si bien no es aplicable ante componentes monoclonales de muy baja concentración, por lo que se requiere el empleo de IF y el uso de antisueros específicos en estos casos puntuales.

 

Inmunotipado orina – Proteína de BJ:

 

Bibliografía

  1. Vallés I, Gavina B, Fernández-Montes, Cárdenas Fernández y Arroyo Fernández M. Evaluación de la electroforesis capilar como método de detección y medida de proteína de Bence Jones. Revista del Laboratorio Clínico Volume 6, Issue 2, April–June 2013, Pages 60-67